一、胚胎期汗腺发生的研究进展（论文文献综述）
郎东浩,巴特,曹胜军,李芳,董行,李俊亮,王凌峰[1]（2022）在《影响汗腺发育的信号通路及其参与汗腺样细胞体外重建的研究进展》文中研究指明大面积深度烧伤患者因汗腺毁损导致体温调节功能基本丧失, 生活质量受到严重影响。目前对于修复汗腺功能的研究较多, 然而人体汗腺发育的机制尚未完全阐明。越来越多的研究表明Wnt/β连环蛋白、外胚叶发育不全/外胚叶发育不全受体/核因子κB、音猬因子、叉头框转录因子等信号通路彼此级联共同影响汗腺发育, 并且已有研究报道可以利用级联信号通路实现汗腺样细胞的体外重建。现就影响汗腺发育的信号通路及其参与汗腺样细胞的体外重建情况作一综述。
郎东浩[2]（2021）在《人脂肪间充质干细胞向汗腺样细胞诱导分化的实验研究》文中研究说明目的:本研究的目的是通过利用过表达外胚叶发育不全基因（Ectodysplasin,EDA）及其受体基因（Ectodysplasin receptor,EDAR）的慢病毒载体转染人脂肪间充质干细胞（Human Adipose derived stem cells hADSCs）,探寻体外诱导汗腺样细胞新的途径,并进一步认识能够调控hADSCs分化为汗腺样细胞的关键基因（EDA和其受体EDAR）,进一步证明hADSCs能够成为向汗腺样细胞诱导分化的更优质种子细胞,为后续复合羊脱细胞真皮基质（Acellular Dermal Matrix ADM）促进创面愈合实验以及汗腺再生治疗提供高质量汗腺样细胞,为临床大面积烧伤促进创面愈合以及愈后汗腺再生带来希望。方法:利用0.1%Ⅰ型胶原酶消化手术后废弃的脂肪组织,将体外分离获得的细胞进行传代培养。选取第3代细胞镜下观察细胞形态、免疫荧光检测细胞标志物CD34、CD44、CD90、CD105表达情况,并进行成脂肪、成软骨、成骨细胞分化能力检测,鉴定所获得的细胞是否为hADSCs。通过携带有EDA和EDAR的慢病毒HBLV-Zs Green-PURO和空载慢病毒分别转染获得的hADSCs,根据转染基因的不同将四组细胞分别命名为EDA-hADSCs组、EDAR-hADSCs组、GFP-hADSCs组（使用空载慢病毒转染）和hADSCs组（未进行转染）,以上4组在相同条件下培养。采用荧光显微镜观察各组细胞绿色荧光蛋白（GFP）表达情况并拍照,利用RT-qPCR和Western blot检测各组细胞中EDA和EDAR的m RNA和蛋白的表达水平,鉴定转染是否成功;利用RT-qPCR和Western blot检测各组细胞中CEA、CK8、CK18 m RNA和蛋白的表达水平,鉴定转染后hADSCs是否分化汗腺样细胞。结果:1、本实验成功在人脂肪组织中分离提取到hADSCs。经免疫荧光染发现hADSCs阳性高表达CD44、CD90、CD105,不表达CD34,并且所分离的hADSCs具有向脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞分化的能力。2、稳转细胞进行荧光显微镜下观察,可见绿色荧光提示转染成功。RT-qPCR显示目的基因转染组中显着上调了EDA和EDAR m RNA的表达,提示拥有较高的转录水平,与过表达对照组以及空白对照组相比差异具有统计学意义（P<0.01）。Western blot结果显示目的基因转染组中EDA和EDAR蛋白有明显表达,而过表达对照组和空白对照组中未见表达。3、RT-qPCR结果显示目的基因组1、目的基因组2中显着上调了CEA、CK8、CK18m RNA的表达,与过表达对照组以及空白对照组相比差异具有统计学意义（P<0.01）。Western bolt结果显示目的基因组1、目的基因组2中CEA、CK8、CK18蛋白均有明显表达,而过表达对照组、空白对照组中未见表达。结论:该实验初步探索了过表达EDA和EDAR基因对于hADSCs向汗腺样细胞分化的影响,证实过表达EDA或EDAR基因均能够诱导hADSCs向汗腺样细胞分化,为利用其他多种类型细胞体外向汗腺样细胞诱导分化提供基础理论依据,并为大面积烧伤患者汗腺毁损后的汗腺再生治疗带来希望。
刘坤坤,赵亚平,高玮,高慧,谢淼[3]（2020）在《间充质干细胞与汗腺细胞融合实现汗腺再生的可行性研究》文中研究指明大面积烧伤患者创面愈合后大量汗腺细胞受损,体内热量难以顺利散发,严重影响患者工作及生活。如何实现大面积深度烧伤创面的汗腺重建,成为目前亟待解决一大难题。融合技术经过几十年的发展已经变得非常成熟,从理论上说利用细胞融合技术可以使任何2个动物细胞通过体细胞杂交而形成新的生物资源。本文就目前干细胞/汗腺细胞融合体实现汗腺再生的可行性进行综述。
朱美抒[4]（2020）在《PRP对毛囊干细胞和毛囊生长的影响及机制》文中研究指明[目的和意义]雄激素性脱发（Androgenic Alopecia,简称AGA）是最常见的脱发病因之一,也是世界上最常见的皮肤疾病之一,目前临床治疗AGA的方法非常局限。近年来,已有富血小板血浆（Platelet-Rich Plasma,简称PRP）用于治疗AGA的文献报道,但是疗效不一,相关机制也知之甚少。本研究的目的是探讨PRP对于AGA治疗效果及其细胞和分子机制,以期为临床应用提供理论和方法学依据。[内容和方法]1、采用雄性C57/BL小鼠（7周）作为研究对象,将PRP分别以传统的钙离子激活后血小板裂解液（PC）、超声激活后血小板裂解液（PS）和超声激活后离心上清液（PSS）分组注射在小鼠背部,初步研究不同处理方式的PRP对毛囊的作用;2、以K14-H2B-GFP转基因小鼠为研究对象,皮内分别注射PSS和生理盐水（NS）进行对比,观察PSS对毛囊干细胞的作用;3、以人永生化角质形成细胞（Immortal Keratinocytes,简称HaCaT细胞）和小鼠真皮来源干细胞群（Skin-derived Precursors,简称SKPs）为研究对象,分别与PSS和PC共培养,观察PSS和PC对这两种毛囊周期循环相关细胞的生物学作用;4、动物体内毛囊重组实验:提取新生的K14-H2B-GFP转基因小鼠的表皮干细胞和SKPs细胞,混合后分别添加PSS和NS,移植在裸鼠背部对称的创口上,对比观察PSS对毛囊重组的影响;5、应用蛋白芯片技术,检测不同方法激活PRP的生长因子水平。[结果]1、与钙离子激活PRP相比,超声激活PRP（PS）和超声激活后离心上清液（PSS）具有更强的促进毛囊从休止期进入到生长期的作用;2、超声激活PRP离心上清液（PSS）具有激活毛囊干细胞的作用,从而促进毛囊提前由休止期进入到生长期;3、PC组和PSS组明显促进角质细胞的增殖,PSS可以促进SKPs的存活;4、超声激活PRP离心上清液（PSS）具有促进毛囊重组,从而促进毛发再生和生长的作用;5、检测的41种生长因子中,超声激活PRP离心上清液（PSS）显示有16种生长因子的含量比钙离子激活PRP高（≥2倍）,这些生长因子大多具有促进毛囊再生作用。[结论]超声激活PRP具有更好的激活毛囊干细胞和促进毛囊再生的作用。
杨涵羽璐[5]（2019）在《中国美利奴羊（新疆军垦型）胎儿期皮肤毛囊发育相关miRNA的筛选与功能研究》文中进行了进一步梳理目的:养羊业是我国农业的重要组成部分,绵羊不但能提供肉制品,而且能为毛纺业提供优质的细羊毛原料,解决优质羊毛供应紧缺的局面。中国美利奴羊是我国最优良的细毛羊品种之一,羊毛从毛囊发育而来,其中次级毛囊的发育决定了羊毛的细度和经济价值,所以阐明羊毛毛囊发育机理至关重要。随着新一代测序技术的出现和发展,人们已经在细毛羊和绒山羊上做了很多研究,很多报道都针对这些miRNA参与毛囊发育的调控进行了研究,尤其是关于绵羊成年时期毛囊发育各阶段的miRNA的相关报道为本研究提供了良好的借鉴基础。前期研究表明,miRNA是一类内源性非编码单链RNA,在生长发育、生物学过程中起重要作用。因此,毛囊发育从胎儿期就已经开始,为阐明miRNA在细毛羊毛囊发育中的作用,本研究通过胎儿期各分枝阶段的皮肤毛囊的组织形态学观察,确定毛囊发育的关键时间节点,进一步通过miRNA组学研究,挖掘出对毛囊发育有调控作用的miRNA,并对关键miRNA进行功能研究,揭示miRNA调控次级毛囊发育的分子机理,为开展基因调控毛囊发育以及优质细毛羊的分子选育提供依据。方法:（1）选择胎龄45d、55d、65d、75d、85d、95d、105d、115d、125d、135d、145d的33只中国美利奴羊（新疆军垦型）胎羊,每个发育时期选取三只,采集体侧部皮肤组织,一份用于miRNA组学分析;另一份放入4%多聚甲醛保存,制作胎儿皮肤毛囊组织的石蜡切片,用于毛囊组织形态学观察。（2）应用Illumina HiSeq 2500 System测序平台进行miRNA组学分析,分析皮肤毛囊不同发育时期的差异表达的miRNAs,预测已知miRNA、保守miRNA和新的miRNA;进行靶基因预测、GO功能富集、KEGG pathway分析;筛选皮肤毛囊发育重要时期的关键miRNA。（3）应用qPCR对18个差异表达的miRNAs进行验证。（4）构建miRNA与靶基因的Psicheck-2 Luciferase双荧光素酶报告基因重组质粒,分别转染293T细胞,通过荧光素酶活性证明miRNA的靶基因。（5）培养绵羊原代皮肤成纤维细胞,通过转染miRNA模拟物与空白对照（NC）,应用Western blot和QPCR确定miRNA对靶基因蛋白和mRNA的表达的调控作用。（6）利用PCR和DNA测序技术,检测了中国美利奴羊（新疆军垦型）和多胎萨福克共计260个个体在miRNA-377基因位点的遗传多态性。结果:（1）通过11个发育时期的胎儿皮肤毛囊组织形态学观察,发现胎儿第45d,皮肤表皮层、真皮层、皮下结缔组织逐渐开始发育;胎儿第55d,皮肤结构发育完全;65d时初级毛囊开始发育,形成囊泡并且逐渐增大,到75d时初级毛囊已经形成;胎儿第85d时次级毛囊开始发生,初级毛囊数量迅速增加。胎儿第105d时,在原始次级毛囊开始再分化次级毛囊。（2）计算85-145d的初级毛囊和次级毛囊密度,结果表明随着胎龄的增长而减小,次级毛囊密度随着胎龄的增长而增大。计算胎儿期85-145d S/P值随着胎龄的增加而逐渐增大。（3）通过miRNA组学分析,在绵羊胎儿发育的11个时期共检测到了179个新的miRNAs和152个已知的miRNAs,其中37个差异表达miRNAs与次级毛囊形态发生相关。（4）采用MEVv4.6进行层次聚类分析,11个毛囊发育期中差异表达的miRNA分为2大类和4个亚类,其中2大类包括胎儿期45-95d的初级毛囊和次级毛囊发育关键时期,以及105-145d的毛囊发育增速时期;四个亚类包括45d、55d和65d的毛囊发育期,75、85和95d的毛囊发育期,105、115和125d的毛囊发育期,135和145d的毛囊发育期。聚类分析结果与毛囊（HF）生长发育的关键时期一致。（5）在75-85d的次级毛囊发育期,共有37个差异表达miRNA,其中上调表达miRNA 19个和下调表达miRNA18个,在次级毛囊发育关键期,novel-126极显着下调表达,miR-196b极显着上调表达。（6）经过GO和Pathway分析,证明PRL信号通路和血小板活化通路在次级毛囊形成过程中起重要作用,oar-miR-133、oar-miR-376c-3p、miR-196b*、miR-2285Ⅰ、miR-504、miR-873、Novel-8*、Novel-17、Novel-20、Novel-64基因参与次级毛囊发育。（7）通过双荧光素酶报告系统证明miRNA767模拟物和DDX5野生型质粒共转染293T细胞能显着抑制荧光素酶的活性（P<0.05）,初步说明miR-767能调节DDX5基因的表达,miR-767的靶基因是DDX5基因;oar-miR-377模拟物和SLC24A2野生型质粒共转染293T细胞能显着抑制荧光素酶的活性（P<0.05）,初步说明oar-miR-377能调节SLC24A2基因的表达,oar-miR-377的靶基因是SLC24A2基因。（8）通过NC和miRNA模拟物分别转染绵羊皮肤成纤维细胞,Western Blot和QPCR检测结果表明,miR-767显着降低DDX5蛋白和mRNA表达量;oar-miR-377显着降低SLC24A2蛋白和mRNA表达量。（9）通过PCR测序证明oar-miR-377核心序列上游276bp检测到T>C碱基突变,在中国美利奴羊（新疆军垦型）和多胎萨福克品种中分布。通过建立线性模型结果显示,基因型效应对细度离散系数存在显着相关（P<0.05）,品种效应与毛纤维直径、细度标准差、细度离散系数存在极显着相关（P<0.01）。关联分析表明CC基因型个体的羊毛纤维直径大,细度离散系数极显着大于TT基因型个体（P<0.01）。综上所述,本研究证明85d为中国美利奴羊次级毛囊发育的关键时期;PRL信号通路和血小板活化通路在次级毛囊形成过程中发挥着重要作用。oar-miR-133、oar-miR-376c-3p、miR-196b*、miR-2285l、miR-504、miR-873、Novel-8*、Novel-17、Novel-20、Novel-64基因是次级毛囊发育的关键基因,miR-767和oar-miR-377均通过转录后分别下调DDX5和SLC24A2基因表达,进而促进次级毛囊发育。oarmiR-377的CC基因型个体的羊毛纤维直径大,因此,在细毛羊育种中选择TT和TC基因型个体。
郭雪峰[6]（2019）在《Wnt10b和FGF18基因在天祝白牦牛毛囊周期性发育中表达的研究》文中研究指明毛囊的形成是真皮层和表皮相互作用的结果,其间充质-上皮相互作用又决定毛囊的命运。毛干的生成是由于真皮乳头间充质细胞与周围上皮基质细胞之间的协调配合来完成。在毛囊周期性发育过程中由许多信号通路参与,其中Wnt10b和FGF18在毛囊的发育过程中发挥重要的作用。本研究以天祝白牦牛体侧部皮肤为材料,采用组织学切片、实时荧光定量PCR技术、免疫组化技术,通过对天祝白牦牛皮肤组织形态结构变化规律、Wnt10b,FGF18基因在皮肤毛囊中转录、蛋白水平的表达规律的研究,揭示Wnt10b,FGF18基因在天祝白牦牛毛囊周期性发育过程作用及其分子调控机制。研究结果如下:1.天祝白牦牛皮肤毛囊周期性变化:在1、3月份,初级毛囊和次级毛囊变化不明显,且毛囊直径较小,同时在毛囊中会有空腔出现;在6月份时,可看到毛囊空腔进一步增多,但毛囊数量及直径相比1、3月份明显变大,初级毛囊和次级毛囊清晰可见;8月份时,会发现毛囊直径进一步增大,毛囊空腔相较1、3、6月份减少;在10、12月份时,毛囊空腔几乎消失,视野中毛囊更加明显可见。对天祝白牦牛毛囊密度及S/P比值统计发现,各月份毛囊个数处在动态平衡过程,没有差异变化。2.实时荧光定量结果显示,Wnt10b基因和FGF18基因在1月到3月和8月到10月表达量有明显的变化,且为相反的变化趋势,说明此时是天祝白牦牛皮肤毛囊周期性发育的时间节点,即生长期到退行期、休止期到生长期节点。3.免疫组化结果显示,Wnt10b和FGF18在毛乳头、内根鞘、外根鞘、基质、及表皮中均有阳性表达,但Wnt10b基因在10月时,阳性表达高于其他月份,而FGF18基因高表达则出现在8月。
王一惠[7]（2019）在《TNF-α调控mRNA m6A甲基化影响间充质干细胞向汗腺特异分化的机制研究》文中指出研究目的探究炎症因子TNF-α是否会影响小鼠间充质干细胞（MSCs）向汗腺细胞分化以及从表观遗传学角度揭示其调控机制。研究内容1.TNF-α对小鼠MSCs汗腺向特异分化的影响（1）MSCs来源广、易获取、免疫原性低和具有多向分化潜能,被认为是以干细胞为中心的细胞治疗的理想细胞来源。利用基因编辑技术、与汗腺细胞在基质胶中共培养等方法可以成功的诱导MSCs在体外获得汗腺细胞的表型,这使得未来深度烧伤患者的汗腺功能再生成为可能。为了解决MSCs体外诱导效率低、诱导周期长,同时为了避免基因编辑技术的脱靶效应、传递系统的有效性和安全性、免疫排斥反应、伦理争论以及基质胶力学性质差、不稳定、在体内被吸收过快等问题,我们利用生物打印技术在体外构建类细胞外基质模拟汗腺发生发育的微环境诱导MSCs向汗腺细胞分化。（2）微环境可以影响MSCs的功能,研究证明TNF-α、IL-6等炎症介质会抑制MSCs向骨、软骨及脂肪细胞分化。结合烧伤患者的生理病理状态,为了有效的诱导MSCs在患者创面向汗腺分化,我们在体外模拟炎症微环境并检测TNF-α对MSCs向汗腺细胞分化的影响。2.TNF-α调控小鼠MSCs向汗腺细胞分化的表观遗传机制（1）多能性调控因子Nanog不仅与胚胎干细胞、肿瘤干细胞分化潜能相关,也参与调控MSCs分化过程,研究证明敲低MSCs的Nanog会抑制其增殖以及分化潜能。为了阐明TNF-α影响MSCs向汗腺细胞分化的机制,我们检测了TNF-α对其Nanog表达的影响。（2）N6-甲基腺苷（m6A）是哺乳动物细胞中最常见的一种mRNA内部甲基化修饰,由以甲基化酶METTL3为主的甲基化酶复合物METTL3/METTLL14/WATP和去甲基化酶FTO和ALKBH5共同调控以维持其动态平衡,参与维持机体多种生理功能和病理过程。Nanog已被证明含有m6A修饰,调控Nanog mRNA的m6A水平可以影响其mRNA丰度进而决定胚胎干细胞、肿瘤干细胞的命运。基于这些研究成果以及为了阐明TNF-α调控MSCs表达Nanog的机制,我们首先探究TNF-α对MSCs总RNA m6A水平的影响以及参与调控这种变化的甲基化酶或去甲基化酶。（3）研究发现甲氯灭酸（MA）是FTO的选择性抑制剂,可与FTO竞争结合m6A修饰的核酸而提高细胞总RNA m6A水平。为了验证FTO的去甲基化作用参与调控TNF-α对MSCs Nanog表达及定向分化的影响,我们用MA的乙酯形式MA2抑制MSCs FTO的去甲基化作用并观察其对MSCs m6A水平、FTO表达、Nanog表达及向汗腺细胞分化的影响。（4）m6A修饰会加速mRNA降解而调控其表达水平。为了进一步揭示TNF-α影响下FTO的去甲基化作用如何调控Nanog表达,我们检测了TNF-α对MSCs Nanog的m6A水平和其半衰期的影响。研究方法1.TNF-α对小鼠MSCs汗腺向特异分化的影响（1）在二维培养、二维培养结合小鼠足部匀浆、以仿生材料为主要成分的类细胞外基质、以仿生材料和小鼠足部真皮匀浆为主要成分的类汗腺细胞外基质四种条件下诱导MSCs向汗腺细胞分化,培养14天后用RT-qPCR方法和免疫荧光方法检测各组细胞表达汗腺细胞标记物的差异。（2）利用生物打印技术构建以仿生材料和小鼠足部真皮匀浆为主要成分的类汗腺细胞外基质诱导MSCs向汗腺细胞分化,分别给与20ng/ml的TNF-α和空白处理,培养14天后,用RT-qPCR方法和免疫荧光方法检测各组细胞表达汗腺细胞标记物的差异。2.TNF-α调控小鼠MSCs向汗腺细胞分化的表观遗传机制（1）在2D培养条件下和3D培养条件下,分别给与MSCs 20ng/ml的TNF-α和空白处理,继续培养6小时后,RT-qPCR方法和Western blot方法检测TNF-α对MSCs表达Nanog的影响。（2）MSCs融合约80%时分别给与20ng/ml的TNF-α和空白处理,继续培养6小时后,免疫荧光检测两组MSCs总RNA的m6A修饰水平的差异。再结合RT-qPCR方法和Western blot方法检测两组细胞中甲基化酶、去甲基化酶表达的差异。（3）用MA2抑制FTO去甲基化作用来验证是否FTO的去甲基化作用在TNF-α调控MSCs分化过程中发挥重要的作用。首先结合免疫荧光方法检测MA2对MSCs总RNA m6A修饰水平的影响。其次利用RT-qPCR方法和Western blot方法检测MA2是否引起FTO在mRNA和蛋白水平的表达发生变化。然后检测了MA2对MSCs Nanog在mRNA和蛋白水平的表达的影响。最后结合RT-qPCR方法和免疫荧光方法验证MSCs在类汗腺细胞外基质中诱导14天后汗腺细胞标记物的表达差异。（4）结合MeRIP-qPCR技术检测TNF-α对MSCs Nanog mRNA的m6A修饰水平影响。其次利用放线菌素D抑制细胞RNA合成,结合RT-qPCR方法验证Nanog mRNA的m6A修饰水平对其半衰期的影响。研究结果1.TNF-α对小鼠MSCs汗腺向特异分化的影响（1）利用生物打印技术在体外构建的以仿生材料、小鼠足部匀浆为主要成分的类汗腺细胞外基质模拟汗腺发生发育的微环境可以诱导MSCs向汗腺细胞分化,在mRNA和蛋白水平表达汗腺细胞标记物。（2）相对与对照组,TNF-α处理组MSCs在同样条件下诱导14天后汗腺细胞标记物的表达明显受到抑制。结果表明炎症因子TNF-α不仅可以抑制MSCs向骨、软骨、脂肪细胞分化,也会抑制其向汗腺细胞分化。2.TNF-α调控小鼠MSCs向汗腺细胞分化的表观遗传机制（1）与对照组相比,TNF-α处理组MSCs Nanog的表达在mRNA和蛋白水平均被抑制,提示TNF-α通过调控Nanog表达影响MSCs分化,这与敲低MSCs的Nanog会抑制其增殖以及分化潜能的理论一致。（2）与对照组相比,MSCs接触TNF-α6小时后总RNA的m6A修饰水平显着提高,去甲基化酶FTO在mRNA和蛋白水平的表达受到抑制,但是两组间甲基化酶METTL3和去甲基化酶ALKBH5基因的表达没有显着差异。综上所述,TNF-α抑制FTO表达导致MSCs总RNA的m6A修饰水平显着提高。（3）与对照组相比,MSCs接触MA2仅6小时后总RNA的m6A修饰水平显着提高。但两组之间FTO在mRNA和蛋白水平的差异没有统计学意义,这与MA2是通过与FTO竞争结合m6A修饰位点而抑制FTO去甲基化作用的理论一致。此外,MA2在mRNA和蛋白水平抑制Nanog的表达,导致MSCs在类汗腺细胞外基质中诱导14天后汗腺细胞标记物的表达明显减少。由此可知,FTO的去甲基化作用在调控MSCs表达Nanog和分化过程中发挥着重要的作用。（4）TNF-α抑制FTO表达提高了MSCs Nanog mRNA的m6A修饰水平导致Nanog mRNA的半衰期明显缩短,这与m6A修饰会加速mRNA降解理论一致。研究结论TNF-α抑制MSCs表达去甲基化酶FTO,导致Nanog mRNA的m6A水平增加,使Nanog mRNA稳定性下降而加速降解,最终表现为MSCs的分化潜能受到抑制。我们的发现首次阐明了m6A修饰在MSCs功能中的重要性,为微环境在转录后水平调控MSCs的多能性提供了新的认识。此外,通过调节m6a修饰维持MSCs分化能力,为干细胞介导的再生医学提供了一个新的治疗靶点。
阿布来提·苏来曼[8]（2018）在《苏博美利奴羊毛囊发育相关LncRNA的筛选与功能分析》文中研究指明绵羊毛囊（HF）发生涉及一系列复杂的表皮和真皮细胞间持续而复杂的信号通路。信号通路中任一配体、受体的遗传突变、表观遗传修饰以及蛋白翻译后修饰的改变等都将影响绵羊毛囊的发生。因此,我们可关注,除目前在mRNA水平关注的蛋白编码基因外的非编码长链RNA（long non-coding RNA,LncRNA）作为新型基因表达的调控因子。研究表明LncRNA对器官形成、细胞分化和疾病发生等各种生理和病理过程具有重要的调控作用,但LncRNA在毛囊形态发生中的调控作用机制还知之甚少。因此,本研究首先在组织形态学水平,通过组织切片的方法对苏博美利奴羊65天、85天、105天和135天胎儿以及出生后7天和30天羔羊肩胛部皮肤组织进行组织形态学研究,旨在探明形态变化规律及毛囊结构,为研究毛囊生长发育及其调控机制提供可靠的组织学基础。此外,在转录组水平对这6个时期的18个cDNA文库进行了 RNA-seq测序,进一步利用分析软件并结合生物信息学方法,对绵羊差异表达LncRNA进行筛选,LncRNA靶基因进行预测,对靶基因进行GO和KEGG富集分析,并通过实时荧光定量PCR技术对深度测序获得的LncRNA和mRNA进行了试验验证,探讨LncRNA在细毛羊毛囊发生中的作用机理。最后在细胞水平,对与毛囊发育相关的TCONS00202353、TCONS00453233、TCONS00428783、SFRP2、DKK1以及Hoxc13进行分析。主要结果如下:（1）组织形态学研究结果显示,苏博美利奴羊在胎龄65天时形成完整的皮肤结构,初级毛囊开始发生形成毛芽;胎龄85天时初级毛囊数量迅速增加,次级毛囊开始发生;胎龄105天时次级毛囊数量也迅速增加,在原始次级毛囊开始分化出再分化次级毛囊,在头部可见穿出体表的毛干;胎龄135天时大多数初级毛囊及一部分次级毛囊基本成熟,各部位均出现穿出体表的毛干:出生后7～30天时次级毛囊继续发育及成熟。（2）在转录组水平对18个cDNA文库进行高通量测序后,共获得1,847,973012条原始序列读数（raw reads）。经过各种质量控制程序处理后,共得到1,726,188919条高质量序列读数（即mappable reads）。与基因组比对,整体比对率≥81%,进一步筛选后共获得1,0193个LncRNA转录本;其中,8653个新预测的LncRNA,1540个已知LncRNA。在毛囊发育6个不同时期中共检测了 471个差异表达的LncRNA;通过对差异LncRNA进行靶基因预测发现,一共有3687顺式作用的靶基因以及1722反式作用的靶基因。功能富集分析发现,将471个差异LncRNA靶基因富集到5509个GO term以及268个Pathway中。感兴趣的是我们发现 3 对 lncRNA-靶基因（TCONS00202353-SFRP2、TCONS00453233-DKK1、TCONS00428783-Hoxc13）可能影响苏博美利奴羊毛囊发育及形态变化。通过实时荧光定量PCR技术对10个差异LncRNA和4个mRNA进行了试验验证。结果表明这些LncRNA和mRNA的表达趋势与RNA-seq结果一致。（３）功能研究结果显示,过表达TCONS00202353会极显着降低SFRP2基因的表达;通过双荧光素酶报告系统验证TCONS00202353和SFRP2之间存在靶标关系。CCK8、克隆形成和流式细胞术实验结果显示,TCONS00202353对绵羊成纤维细胞增殖及凋亡有促进作用,这说明TCONS00202353可以调控苏博美利奴羊毛囊发育。本研究进行的绵羊组织形态学、LncRNA转录组的鉴定以及功能分析,将进一步促进绵羊LncRNA功能和基因调控机制的研究。
彭梦玲[9]（2018）在《胚胎期肉鸡脂肪代谢的蛋白质组学和代谢组学分析及（-）-羟基柠檬酸调控机制研究》文中研究指明降低肉鸡腹部脂沉积、提高肉品品质是家禽养殖业亟待解决的关键问题。关键性代谢中间体的结构类似物作为化学信号对代谢途径发生影响,从而定向地改变动物的生产性能。作为糖、脂代谢途径中重要的代谢中间体—柠檬酸的结构类似物,（-）-羟基柠檬酸[（-）-HCA]潜在的生物学功能在于调节机体糖代谢和脂代谢间的流向,但其对家禽营养物质代谢的影响则鲜有报道。因此,本研究在探讨肉鸡胚胎在不同发育阶段血清差异代谢物及肝脏蛋白质表达变化规律的基础之上,探讨胚胎导入（-）-羟基柠檬酸对家禽代谢变化的影响,尤其是其调控家禽脂代谢的影响及其生物化学机制。研究主要包括以下五个方面的内容:1基于代谢组学技术揭示肉鸡胚胎发育过程中血清代谢物变化肉鸡因天然具有高血糖和胰岛素抵抗等特点而被用于研究代谢异常、肥胖等疾病模型,但目前对于肉鸡胚胎发育期间血清代谢物的变化则未见详细的报道。因此,本试验选取180枚罗氏308肉鸡种蛋（65土0.2g）,置于温度37±0.5℃℃,湿度65%条件下孵化,每30min90°翻转一次。孵化至14日龄（E14）、19日龄（E19）和出壳1日龄（H1）时,收集胚胎血清样本,并应用液相色谱-质谱和四级杆-飞行时间系统（LC/MS-QTOF）结合主成分分析（PCA）和偏最小二乘判别分析（PLS-DA）以及变量投影重要性（VIP）确定差异变化的代谢产物。应用代谢物富集分析（MESA）法分析差异代谢产物涉及的主要代谢途径。试验结果表明,与E14日龄相比,5个核心血清代谢物（L-谷氨酰胺、L-苏氨酸、雌酮、果糖和硫辛酰胺）在E19日龄发生显着变化;与E19日龄相比,7个核心血清代谢物（L-谷氨酰胺、L-亮氛酸、L-异亮氨酸、一磷酸腺苷、一磷酸鸟苷、α-酮戊二酸和γ-氨基丁酸）在H1发生显着变化。E14日龄到E19日龄期间,胚胎通过升高L-谷氨酰胺和L-苏氨酸的含量促进蛋白质合成,通过升高雌酮含量促进性腺发育;该结果提示血清中谷氛酰胺、苏氨酸和雌酮含量的变化可作为评价肉鸡胚胎发育的候选指标;在胚胎发育后期,α-酮戊二酸起到促进三羧酸循环和胚胎生长的重要作用,而L-谷氨酰胺、L-异亮氨酸和L-亮氨酸含量显着下降,提示这三种氨基酸可作为早期雏鸡饲料添加剂满足其生长发育需求。2基于蛋白质组学技术分析肉鸡胚胎发育过程中肝脏蛋白表达的变化为探讨肉鸡胚胎发育不同阶段肝脏蛋白表达水平的变化,本试验选取180枚重量相近的罗氏308肉鸡种蛋,置于温度37±0.5℃℃,湿度65%条件下孵化,每30 min 90°翻转一次。孵化至E14、E19和H1时采集肝脏组织样本,应用相对和绝对定量的等量异位标签（iTRAQ）结合生物信息学分析技术筛选核心差异蛋白。结果显示,在E19和E14两个日龄之间共筛选出26个核心差异蛋白,主要促进脂肪酸降解（上调ACAA2、CPT1A 和 ACOX1）、内质网蛋白加工（上调 PDIs、CALR3、LMAN1 和 UBQLN1）和糖异生（上调 ALDH3A2、ALDH7A1、FBP1、FBP2、GPI 和 PGM2）。在 H1 和 E19两个日龄之间共筛选出15个核心差异蛋白,主要抑制或减弱糖酵解（下调AKR1A1、LDHA和LDHB;上调PGM2）和嘌呤代谢（上调NT5C）,促进核糖体相关蛋白表达水平（RPL18A、RPL19、RPL7A、RPLP1、RPS2 和 RPS3A）。试验结果提示,糖酵解不是胚胎发育后期产生能量的主要方式,而ACAA2、CPT1A和ACOX1是调控胚胎期肉鸡脂代谢的关键因子。3（-）-羟基柠檬酸对胚胎期肉鸡肝脏脂肪代谢的影响为探讨（-）-HCA对肉鸡胚胎发育的安全性及脂滴沉积的影响,240枚罗氏308肉鸡种蛋被随机分为6组,并分别按照0、0.1、0.5、1.0、10.0和50 mg/kg（n=40）蛋重导入（-）-HCA,其溶解于50 μLDMSO溶剂,对照组导入50μL溶剂。置于温度37±0.5℃℃,湿度65%条件下孵化,每30 min 90°翻转一次。孵化至19日龄,采集血液及组织样品、待测。试验结果表明,（-）-HCA对不同发育期阶段鸡胚重量、肝脏绝对重量、脾脏绝对重量、心脏绝对重量和肾脏绝对重量等均无显着影响;血清中白蛋白、球蛋白、总蛋白、Cr、磷酸、AST、ALT和LDH含量均无显着变化,但0.1-50mg/kg（-）-HCA处理显着降低血清尿素氮含量（P<0.05）;血液中红细胞和白细胞数量与对照组相比无显着变化。PAS和油红O染色结果显示,与对照组相比,1-50mg/kg（-）-HCA处理极显着增加糖原颗粒数量和减少肝脏脂滴数量（P<0.01）;血清和肝脏脂代谢相关指标检测结果显示,1-50mg/kg（-）-HCA处理显着降低血清和肝脏中TG含量（P<0.05）,显着增加肝脏NEFA含量以及肝脏HL和LPL活性（P<0.05）,极显着增加肝糖原含量（P<0.01）;0.5-50mg/kg（-）-HCA 处理显着降低血清 LDL-C 含量（P<0.05）;0.5-1 mg/kg（-）-HCA处理显着增加血清葡萄糖含量（P<0.05）;0.1-50 mg/kg（-）-HCA极显着增加血清ADP含量（P<0.01）;不同浓度（-）-HCA处理对血清中TC、HDL-C、NEFA、T3、INS和GLU含量均无显着变化。0.5-10 mg/kg（-）-HCA处理显着降低ACLY、ME1和SREBP-1c mRNA相对表达水平（P<0.05）,1-10 mg/kg（-）-HCA处理显着降低FAS mRNA相对表达水平（P<0.05）,0.5-50 mg/kg（-）-HCA处理显着升高PPARαmRNA相对表达水平（P<0.05）。该研究结果提示,0.1-50mg/kg（-）-HCA处理对鸡胚发育是安全的;（-）-HCA减少脂滴沉积可能主要是通过降低脂肪酸合成基因ACLY、ME1和SREBP-1c和FAS mRNA的表达而抑制脂肪酸合成,从而降低甘油三酯的合成。4（-）-羟基柠檬酸调节胚胎期肉鸡血清差异代谢物及关键代谢途径分析试验选取360枚重量相近的罗氏308肉鸡种蛋随机分为两组,对照组导入50 μL DMSO,试验组导入含1 mg/kg蛋重（-）-HCA。置于温度37±0.5℃,湿度65%条件下孵化,每30 min 90°翻转一次。孵化至E19和H1时收集胚胎肝脏组织和血清样本,-8C℃保存备用。利用LC/MS-QTOF技术结合PCA和PLS-DA以及VIP分析确定差异变化的代谢产物。应用MESA法分析差异代谢产物涉及的主要代谢途径。试验结果表明,与对照组相比,（-）-HCA处理下在E19和H1日龄鉴定出的差异代谢产物主要分为4类:糖类、脂类、氨基酸和其他类别。对（-）-HCA处理组样品采用PCA模型进行主成分分析,发现（-）-HCA处理使得代谢模式图呈现规律变化,与对照组相比差异显着。在E19日龄,（-）-HCA可通过升高谷氨酰胺、苏氨酸、精氨酸、丙氨酸和谷氨酸的含量促进蛋白质合成;通过升高苹果酸、柠檬酸、异柠檬酸和延胡索酸含量加速三羧酸循环;通过升高葡萄糖和果糖含量、降低乳糖含量加快糖异生进程;通过升高脂酰辅酶A的含量、降低花生四烯酸合成的重要脂质介质前列腺素含量促进脂肪分解,抑制或减少脂肪合成。在H1日龄,（-）-HCA可通过升高谷氨酰胺、苏氨酸、丙氨酸、亮氨酸和谷氨酸的含量促进蛋白质合成;通过升高苹果酸、柠檬酸、异柠檬酸和延胡索酸含量加速三羧酸循环;通过降低3-磷酸-D-甘油磷酸和乳酸含量抑制或减少糖酵解进程。试验结果提示在胚胎发育后期,（-）-HCA通过对代谢物的流向进行重分配促进蛋白质合成、糖原合成以及脂肪氧化利用,最终抑制或减少脂肪沉积。同时,促进胚胎生长发育、提高其应对环境变化能力。5（-）-羟基柠檬酸调控胚胎期肉鸡脂肪代谢主要效应蛋白的筛选和鉴定试验选取360枚重量相近的罗氏308肉鸡种蛋随机分为两组,对照组导入50μL DMSO,试验组导入含1 mg/kg蛋重（-）-HCA,其溶于DMSO溶剂中。置于温度37±0.5℃,湿度65%条件下孵化,每30min90°翻转一次。孵化至E14、E19和H1时收集胚胎肝脏组织样本,-80℃保存备用。利用基于iTRAQ的蛋白质组学的方法,筛选出（-）-HCA调节肉鸡胚胎期脂肪代谢关键代谢途径的效应蛋白因子。试验结果表明,与对照组相比,（-）-HCA处理后在E19日龄共筛选到8个核心差异蛋白,主要是促进脂肪分解（上调ACSL1、ACSL5、CPT1A和ACOX2表达水平）,促进糖异生并抑制或降低糖酵解（上调FBP2、ALDH3A2和GPI,下调ALDOC）;而在H1日龄共筛选到12个核心差异蛋白,主要是促进脂肪分解（上调CTP2、ACAT1、ALDH7A1、ECHSI、ECI2和ACAA2,下调ALDH9A1）,抑制或降低糖酵解（上调ACSS1,下调PFKL和LDHB）,加速柠檬酸循环（上调IDH1和ACO1）。试验结果提示在胚胎发育后期,（-）-HCA减少脂肪沉积的机制主要是通过调节脂肪代谢相关蛋白表达水平促进脂肪氧化利用。
何军敏[10]（2018）在《苏博美利奴羊毛囊发育不同时期相关基因的筛选》文中研究说明本研究采集苏博美利奴羊胚胎期65 d（G1,初级毛囊形成）、85 d（G2,次级毛囊形成）、105d（G3,次级获得性毛囊形成）、135 d（G4,成熟毛囊）、出生后7 d（G5）、出生后30 d（G6）左侧肩胛部皮肤组织（相同时期3个样本作为生物学重复）并进行转录组的测序。运用生物信息学对毛囊发育不同时期差异的表达基因进行分析,以期能够筛选出与毛囊发育相关的候选基因,为深入了解毛囊发育的机理提供分子理论依据。同时采用RT-PCR对测序结果进行了验证,并运用PCR-SSCP技术进行了KAP16基因与毛性状关联分析。结果如下:（1）运用Illumina Hiseq 2000对6个时期苏博美利奴羊的18个皮肤样进行了RNA-seq的测序。共获得每个样本12 G的数据量,原始Reads均达到7 300万以上,Clean reads均达到6 800万以上,clean比例在90.98%-94.79%之间。（2）分析差异表达基因发现,苏博美利奴羊6个毛囊发育时期共筛选到7 879个差异表达基因,其中G2/G1共筛选出差异表达基因1 562个;G3/G2共筛选出差异表达基因2 302个;G4/G3共筛选出差异表达基因1 520个;G5/G4共筛选出差异表达基因699个;G6/G5共筛选出差异表达基因166个;G6/G1共筛选出差异表达基因6 561个。苏博美利奴羊6个毛囊发育时期共筛选到12 623个差异表达新基因,其中G2/G1共筛选出差异基因1 762个;G3/G2共筛选出差异基因2 066个;G4/G3共筛选出差异基因611个;G5/G4共筛选出差异基因842个;G6/G5共筛选出差异基因28个;G6/G1共筛选出差异基因10 691个。（3）GO功能分析发现差异表达基因在细胞成分、分子功能和生物过程中显着富集（P<0.05）。KEGG通路分析发现部分差异基因注释在Wnt、Notch、Hedgehog、TGF-β、MAPK、TNF和Hippo等通路中。通过K-means分析基因的表达趋势,发现6个时期7 879个差异表达基因可以分为10类,每一类基因在毛囊发育过程中可能发挥相近的功能。运用Cytoscape软件进行各时期差异表达基因PPI分析,发现了KRT14、FGF7、Notch1、ALB及CFTR等起关键作用的蛋白。（4）采用RT-PCR对10个差异表达的基因在基因表达水平进行了验证,发现RT-PCR结果与转录组测序结果一致,表明测序结果准确可靠。（5）采用重测序和PCR-SSCP技术,验证KAP16候选基因的2个SNPs在细毛羊群体中的遗传多态性。χ2检验表明,C41006938T和T41007938C位点均处于哈代温伯格平衡状态（P>0.05）。C41006938T和T41007938C突变位点的多态信息含量分别为0.37和0.18,所以苏博美利奴羊群体在该基因的遗传变异处在中等水平。C41006938T不同基因型对体格大小和鉴定时体重有显着影响（P<0.05）;T41007938C不同基因型对纤维直径变异系数有极显着影响（P<0.01）,对剪毛量和弯曲有显着影响（P<0.05）;C41006938T和T41007938C单倍型对剪毛量有极显着影响（P<0.01）,对纤维直径变异系数有显着影响（P<0.05）。
二、胚胎期汗腺发生的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、胚胎期汗腺发生的研究进展（论文提纲范文）
（2）人脂肪间充质干细胞向汗腺样细胞诱导分化的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 实验一 、hADSCs过表达EDA和EDAR基因细胞系的制备 |
| 1.实验材料与溶液配制 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 试剂配制 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 hADSCs的培养 |
| 2.2 hADSCs的鉴定 |
| 2.2.1 hADSCs细胞形态学观察 |
| 2.2.2 免疫荧光染色法检测hADSCs表面标记蛋白 |
| 2.2.3 hADSCs的多项分化能力检测 |
| 2.3 实验分组 |
| 2.4 转染细胞并筛选稳定表达细胞系 |
| 2.5 RT-qPCR检测hADSCs中EDA及EDAR mRNA表达水平 |
| 2.5.1 RNA的提取 |
| 2.5.2 反转录为cDNA |
| 2.5.3 RT-qPCR检测转染后细胞中EDA及EDAR的mRNA表达水平 |
| 2.6 Western Blot检测hADSCs中EDA及EDAR蛋白表达水平 |
| 3.结果 |
| 3.1 hADSCs的细胞形态学观察 |
| 3.2 hADSCs的表面标记蛋白检测 |
| 3.3 hADSCs的多向分化能力检测 |
| 3.3.1 成脂细胞诱导 |
| 3.3.2 成骨细胞诱导 |
| 3.3.3 成软骨细胞诱导 |
| 3.4 过表达EDA及EDAR慢病毒载体转染hADSCs |
| 3.5 hADSCs中EDA和EDAR的检测 |
| 4.讨论 |
| 二、EDA及EDAR基因重编程hADSCs向汗腺样细胞诱导分化 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 hADSCs的培养 |
| 2.2 实验分组 |
| 2.3 转染细胞并筛选稳定表达细胞系 |
| 2.4 汗腺标志物的检测 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 影响汗腺发育的信号通路及其参与汗腺样细胞体外重建的研究进展 |
| 参考文献 |
| 缩略语表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（3）间充质干细胞与汗腺细胞融合实现汗腺再生的可行性研究（论文提纲范文）
| 1 细胞融合技术 |
| 1.1 细胞融合技术的定义 |
| 1.2 细胞融合技术的发展简史 |
| 1.3 目前细胞融合技术取得的成果 |
| 1.4 通过利用细胞融合技术获得大量目的细胞的案例 |
| 2 脐带间充质干细胞(UCB-MSCs) |
| 3 汗腺细胞 |
| 4 类汗腺细胞 |
| 4.1 目前获得类汗腺细胞的主要方式是通过干细胞诱导技术 |
| 4.2 目前未能获得具有分泌汗液功能的组织工程皮的主要制约瓶颈 |
| 4.3 通过构建汗腺细胞和人间充质干细胞来获得大量具有分泌液功能的融合细胞的新进展 |
（4）PRP对毛囊干细胞和毛囊生长的影响及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 富血小板血浆对毛囊生长周期的影响 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 实验材料和方法 |
| 1.2.1 实验动物 |
| 1.2.2 实验试剂和耗材 |
| 1.2.3 实验仪器 |
| 1.2.4 实验方法 |
| 1.2.4.1 富血小板血浆(PRP)的制备及激活 |
| 1.2.4.1.1 钙离子激活PRP(PC)的制备 |
| 1.2.4.1.2 超声激活PRP(PS)的制备 |
| 1.2.4.1.3 超声激活PRP上清液(PSS)的制备 |
| 1.2.4.2 动物实验方法及组织学检测 |
| 1.2.4.2.1 实验动物分组和皮内注射 |
| 1.2.4.2.2 实验动物脱毛 |
| 1.2.4.2.3 皮肤组织冰冻切片 |
| 1.2.4.2.4 组织切片的碱性磷酸酶(AP)染色 |
| 1.2.4.3 统计学分析方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 统计学结果 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 实验结论 |
| 第二章 富血小板血浆对毛囊干细胞的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料和方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂和耗材 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.2.4 实验方法 |
| 2.2.4.1 PSS的制备 |
| 2.2.4.2 动物实验方法及组织学检测 |
| 2.2.4.2.1 转基因小鼠皮内注射 |
| 2.2.4.2.2 转基因小鼠皮肤组织冰冻切片 |
| 2.2.4.2.3 转基因小鼠皮肤组织Ki67染色 |
| 2.2.4.2.4 转基因小鼠皮肤组织K15染色 |
| 2.2.4.3 统计学分析方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 统计学结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 实验结论 |
| 第三章 富血小板血浆对毛囊细胞的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料和方法 |
| 3.2.1 HaCaT细胞 |
| 3.2.2 实验试剂和耗材 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.2.4 实验方法 |
| 3.2.4.1 富血小板血浆(PRP)的制备 |
| 3.2.4.1.1 钙离子激活PRP(PC)的制备 |
| 3.2.4.1.2 超声激活PRP上清液(PSS)的制备 |
| 3.2.4.2 细胞生物学实验方法 |
| 3.2.4.2.1 鼠SKPs的分离和培养 |
| 3.2.4.2.2 鼠SKPs分别与PSS和PC共培养 |
| 3.2.4.2.3 人HaCaT细胞复苏 |
| 3.2.4.2.4 人HaCaT细胞分别与PSS和PC共培养 |
| 3.2.4.3 分子生物学实验方法 |
| 3.2.4.3.1 CCK-8测量 |
| 3.2.4.3.2 细胞死活染色 |
| 3.2.4.4 统计学分析方法 |
| 3.3 实验结果及统计学结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 实验结论 |
| 第四章 富血小板血浆对毛囊真皮乳头的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料和方法 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验试剂和耗材 |
| 4.2.3 实验仪器 |
| 4.2.4 实验方法 |
| 4.2.4.1 超声激活PRP上清液(PSS)的制备 |
| 4.2.4.2 细胞生物学实验方法 |
| 4.2.4.2.1 鼠表皮干细胞的分离 |
| 4.2.4.2.2 鼠SKPs的分离 |
| 4.2.4.3 动物实验方法 |
| 4.2.4.3.1 毛囊重组实验 |
| 4.2.4.4 统计学分析方法 |
| 4.3 实验结果及统计学结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 实验结论 |
| 第五章 富血小板血浆的蛋白分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料和方法 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 实验试剂和耗材 |
| 5.2.3 实验仪器 |
| 5.2.4 实验方法 |
| 5.2.4.1 富血小板血浆(PRP)的制备 |
| 5.2.4.1.1 钙离子激活PRP (PC)的制备 |
| 5.2.4.1.2 超声激活PRP (PS)的制备 |
| 5.2.4.1.3 超声激活PRP上清液(PSS)的制备 |
| 5.2.4.2 分子生物学实验方法 |
| 5.2.4.3 分析方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 实验结论 |
| 第六章 全文总结 |
| 第七章 雄激素性脱发的相关研究进展(综述) |
| 参考文献 |
| 专用名词及缩略语 |
| 攻读学位期间成果 |
| 一、个人简介 |
| 二、发表论文 |
| 三、专着 |
| 四、专利 |
| 五、大会发言 |
| 致谢 |
（5）中国美利奴羊（新疆军垦型）胎儿期皮肤毛囊发育相关miRNA的筛选与功能研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要缩写词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.研究的目的与意义 |
| 2.国内外研究进展 |
| 2.1 羊毛纤维及毛囊的研究概况 |
| 2.2 高通量测序技术的发展与应用 |
| 2.3 非编码RNA的研究进展 |
| 2.3.1 非编码RNA的分类 |
| 2.3.2 lncRNA的研究进展 |
| 2.3.3 circularRNA的生物学功能 |
| 2.3.4 microRNA的生物起源 |
| 2.3.5 microRNA在畜禽上的应用 |
| 2.4 羊皮肤毛囊组学相关研究 |
| 3.研究内容与技术路线 |
| 3.1 研究内容 |
| 3.2 技术路线 |
| 第二章 试验研究 |
| 试验一 中国美利奴羊(新疆军垦型)胎羊皮肤毛囊结构及形态学观察 |
| 前言 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 主要仪器设备 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 试验动物 |
| 1.1.4 组织切片制作 |
| 1.1.5 苏木精-伊红染色(HE染色) |
| 1.2 结果与分析 |
| 1.2.1 皮肤的结构 |
| 1.2.2 毛囊形态发生变化过程 |
| 1.2.3 毛囊密度与S/P比值 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 试验二 不同发育时期的胎羊皮肤毛囊差异表达miRNA的筛选 |
| 前言 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 主要仪器设备 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 试验动物 |
| 2.1.4 总RNA提取 |
| 2.1.5 总RNA质量鉴定 |
| 2.1.6 构建文库与高通量测序 |
| 2.1.7 生物信息学分析 |
| 2.1.7.1 测序数据 |
| 2.1.7.2 序列比对 |
| 2.1.7.3 已知miRNA鉴定和新miRNA预测 |
| 2.1.7.4 小RNA分类统计 |
| 2.1.7.5 miRNA表达量归一化分析 |
| 2.1.7.6 差异分析 |
| 2.1.7.7 差异miRNA聚类分析 |
| 2.1.7.8 靶基因预测与功能富集分析 |
| 2.1.8 差异表达miRNA的验证 |
| 2.1.8.1 皮肤毛囊中miRNA的提取 |
| 2.1.8.2 miRNA的反转录 |
| 2.1.8.3 miRNA的QPCR验证 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 总RNA质量控制 |
| 2.2.2 测序数据统计 |
| 2.2.3 miRNA长度分析 |
| 2.2.4 miRNA的分类注释 |
| 2.2.5 miRNA的序列比对 |
| 2.2.6 不同毛囊发育阶段差异表达miRNA的鉴定 |
| 2.2.7 差异miRNA聚类分析 |
| 2.2.8 靶基因的功能分析 |
| 2.2.9 KEGG通路分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 试验三 miR-767调控靶基因DDX5的研究 |
| 前言 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 主要仪器设备 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 绵羊皮肤成纤维细胞的原代培养 |
| 3.1.4 miRNA与靶基因结合位点预测 |
| 3.1.5 绵羊DDX5基因3’UTR扩增和鉴定 |
| 3.1.6 靶基因野生型和突变型载体构建 |
| 3.1.7 miRNA模拟物化学合成 |
| 3.1.8 细胞培养 |
| 3.1.8.1 细胞复苏 |
| 3.1.8.2 细胞传代 |
| 3.1.9 细胞转染 |
| 3.1.10 双荧光素报告酶检测系统 |
| 3.1.11 Western blot检测miRNA对靶基因翻译水平的影响 |
| 3.1.12 QPCR检测miRNA对靶基因mRNA水平的影响 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 绵羊皮肤成纤维细胞培养 |
| 3.2.2 miRNA与靶基因结合位点预测 |
| 3.2.3 双荧光酶报告基因载体构建 |
| 3.2.4 双荧光素酶报告系统检测 |
| 3.2.5 Western blot检测miRNA对靶基因蛋白水平的影响 |
| 3.2.6 QPCR检测miRNA对靶基因mRNA水平的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 试验四 oar-miR-377调控靶基因SLC24A2的研究 |
| 前言 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 主要仪器设备 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 miRNA与靶基因结合位点预测 |
| 4.1.4 绵羊SLC24A2 基因3’UTR扩增和鉴定 |
| 4.1.5 靶基因野生型和突变型载体构建 |
| 4.1.6 miRNA模拟物化学合成 |
| 4.1.7 双荧光素报告酶检测系统 |
| 4.1.8 Western blot和QPCR验证oar-miR-377对SLC24A2翻译和转录水平的影响 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 miRNA与靶基因结合位点预测 |
| 4.2.2 双荧光酶报告基因载体构建 |
| 4.2.3 双荧光素酶报告系统检测 |
| 4.2.4 Western blot检测miRNA对靶基因蛋白水平的影响 |
| 4.2.5 QPCR检测miRNA对靶基因mRNA水平的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 试验五 oar-miR-377、OAR-MIR-133和MIR-767的遗传多态性分析 |
| 前言 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 主要仪器设备 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 试验动物 |
| 5.1.4 羊毛纤维直径的测定 |
| 5.1.5 基因组DNA模板的制备 |
| 5.1.6 引物设计与合成 |
| 5.1.7 PCR扩增及SNPs检测 |
| 5.1.8 绵羊群体中oar-miR-377、oar-miR-133和miR-767的前体和侧翼序列SN Ps的基因型分析 |
| 5.1.9 oar-miR-377、oar-miR-133和miR-767的前体和侧翼序列SNPs与羊毛品质的关联分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 羊毛纤维直径的测定结果 |
| 5.2.2 绵羊miRNAs前体PCR扩增 |
| 5.2.3 miRNAs前体的遗传多态性分析 |
| C位点遗传多态性分析'>5.2.4 oar-miR-377的-276T>C位点遗传多态性分析 |
| CSNP与毛细度的关联分析'>5.2.5 oar-miR-377的-276T>CSNP与毛细度的关联分析 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第三章 全文结论 |
| 第四章 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
| 石河子大学博士研究生学位论文导师评阅表 |
（6）Wnt10b和FGF18基因在天祝白牦牛毛囊周期性发育中表达的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 哺乳动物毛囊生长发育 |
| 1.1.1 毛囊的构成 |
| 1.1.2 毛囊的发生 |
| 1.1.3 毛囊的周期性生长 |
| 1.2 毛囊周期性发育的分子调控机制 |
| 1.2.1 调控毛囊发育的相关信号通路 |
| 1.2.2 MicroRNA调控毛囊发育 |
| 1.2.3 lncRNA调控毛囊发育 |
| 1.3 Wnt10b基因的研究进展 |
| 1.3.1 引言 |
| 1.3.2 Wnt10b结构 |
| 1.3.3 Wnt10b与胚胎发育 |
| 1.3.4 Wnt10b参与毛囊发育及周期性循环 |
| 1.3.5 结语与展望 |
| 1.4 FGF18基因的研究进展 |
| 1.4.1 引言 |
| 1.4.2 FGF18结构 |
| 1.4.3 FGF18 的作用机理 |
| 1.4.4 FGF18 与胚胎发育 |
| 1.4.5 FGF18 参与毛囊发育 |
| 1.4.6 FGF18 参与骨骼的发育 |
| 1.4.7 FGF18 的其他功能 |
| 1.4.8 结语与展望 |
| 1.5 研究目的及意义 |
| 1.6 本文研究思路 |
| 第2章 天祝白牦牛皮肤毛囊发育的形态学研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验时间与地点 |
| 2.2.2 实验动物 |
| 2.2.3 实验仪器和试剂 |
| 2.2.4 实验方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 毛囊结构 |
| 2.3.2 天祝白牦牛毛囊的周期性变化过程 |
| 2.3.3 毛囊密度及S/ P比值 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 Wnt10b, FGF18 在天祝白牦牛皮肤毛囊中的表达及分布 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验仪器与试剂 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 总RNA的提取 |
| 3.3.2 实时定量RT-PCR结果 |
| 3.3.3 免疫组化结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 Wnt10b基因 |
| 3.4.2 FGF18 基因 |
| 3.5 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 硕士期间发表的论文与专利 |
| 致谢 |
（7）TNF-α调控mRNA m6A甲基化影响间充质干细胞向汗腺特异分化的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、TNF-α对小鼠MSCs向汗腺特异分化的影响 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验对象 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.1.4 实验试剂配制 |
| 1.1.5 小鼠骨髓MSCs分离培养 |
| 1.1.6 汗腺细胞分离培养 |
| 1.1.7 利用生物打印技术在体外构建汗腺细胞外基质诱导小鼠MSCs向汗腺细胞分化 |
| 1.1.8 TNF-α处理小鼠MSCs |
| 1.1.9 RT-qPCR方法检测不同条件下小鼠MSCs表达汗腺细胞标记物基因的差异 |
| 1.1.10 免疫荧光方法检测不同条件下小鼠MSCs表达汗腺细胞标记物蛋白的差异 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 不同诱导条件对小鼠MSCs向汗腺细胞分化的影响 |
| 1.2.2 TNF-α对小鼠MSCs向汗腺细胞分化的影响 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 小鼠MSCs在体外类汗腺细胞外基质环境中可以向汗腺细胞分化 |
| 1.3.2 炎症介质TNF-α抑制小鼠MSCs向汗腺细胞分化 |
| 1.4 小结 |
| 二、TNF-α调控小鼠MSCs向汗腺细胞分化的表观遗传机制 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验对象 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.1.4 实验试剂配制 |
| 2.1.5 小鼠骨髓MSCs分离培养 |
| 2.1.6 利用生物3D打印技术在体外构建汗腺细胞外基质诱导小鼠MSCs向汗腺细胞分化 |
| 2.1.7 TNF-α/MA2处理小鼠MSCs |
| 2.1.8 RT-qPCR方法检测TNF-α/MA2对小鼠MSCs多能性因子Nanog及m6A相关调节酶基因表达的影响 |
| 2.1.9 Western blot方法检测TNF-α/MA2对小鼠MSCs多能性因子Nanog及m6A相关调节酶蛋白表达的影响 |
| 2.1.10 免疫荧光方法检测TNF-α/MA2对小鼠MSCs总 RNA的 m6A水平的影响 |
| 2.1.11 RT-qPCR方法检测MA2对小鼠MSCs表达汗腺细胞标记物基因的影响 |
| 2.1.12 免疫荧光方法检测MA2对小鼠MSCs表达汗腺细胞标记物蛋白的影响 |
| 2.1.13 MeRIP-qPCR方法检测TNF-α对小鼠MSCs Nanog mRNA的 m6A水平的影响 |
| 2.1.14 放线菌素D抑制小鼠MSCs转录检测TNF-α对 Nanog mRNA稳定性的影响 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 TNF-α对小鼠MSCs多能性因子Nanog表达的影响 |
| 2.2.2 TNF-α对小鼠MSCs总RNA的 m6A水平及相关调节酶表达的影响 |
| 2.2.3 抑制FTO去甲基化作用对小鼠MSCs的影响 |
| 2.2.4 FTO去甲基化作用调控小鼠MSCs Nanog表达的机制 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 炎症介质TNF-α抑制小鼠MSCs表达Nanog |
| 2.3.2 TNF-α抑制小鼠MSCs表达FTO提高总RNA的m6A修饰水平 |
| 2.3.3 MA2抑制FTO的去甲基化作用阻碍小鼠MSCs向汗腺细胞分化 |
| 2.3.4 FTO催化m6A去甲基化维持Nanog mRNA的稳定性 |
| 2.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 烧伤皮肤再生的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）苏博美利奴羊毛囊发育相关LncRNA的筛选与功能分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 绵羊毛囊结构、形态发育的研究现状 |
| 1.2.1 绵羊皮肤结构观察 |
| 1.2.2 绵羊毛囊结构研究 |
| 1.3 毛囊发育相关基因的研究进展 |
| 1.3.1 Wnt家族基因对毛囊发育的作用 |
| 1.3.2 肿瘤坏死因子家族对毛囊发育的作用 |
| 1.4 LncRNA的研究进展 |
| 1.4.1 LncRNA的概述 |
| 1.4.2 LncRNA的分类 |
| 1.4.3 LncRNA的生物学功能 |
| 1.4.4 LncRNA在畜牧研究中的应用 |
| 1.4.5 LncRNA研究的方法 |
| 1.5 LncRNA国内外研究现状CiteSpace可视化分析 |
| 1.5.1 世界和中国LncRNA研究发文量趋势分析 |
| 1.5.2 LncRNA研究主要作者分析 |
| 1.5.3 LncRNA研究主要机构分析 |
| 1.5.4 LncRNA研究主要高频热点词汇的界定 |
| 1.6 苏博美利奴羊 |
| 1.6.1 苏博美利奴羊来源 |
| 1.6.2 特征特性 |
| 1.6.3 苏博美利奴羊与其他绵羊品种性能对比分析 |
| 1.7 组织形态学技术 |
| 1.8 研究内容 |
| 1.9 本研究技术路线 |
| 第2章 苏博美利奴羊皮肤毛囊结构及形态发育研究 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 组织样本采集与固定 |
| 2.1.3 手术所用仪器 |
| 2.1.4 试验仪器设备 |
| 2.1.5 试验试剂 |
| 2.1.6 试验试剂的配制及处理 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 石蜡切片制作 |
| 2.2.2 HE染色(苏木精-伊红)染色 |
| 2.2.3 石蜡切片组织学观察及统计分析 |
| 2.2.4 读片 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 毛囊数量 |
| 2.3.2 皮肤的结构 |
| 2.3.3 毛囊的结构 |
| 2.3.4 初级毛囊形态发生变化过程 |
| 2.3.5 次级毛囊形态发生变化过程 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 苏博美利奴羊皮肤毛囊发育相关LncRNA的研究 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验动物 |
| 3.1.2 样品的采集 |
| 3.1.3 试验用仪器设备 |
| 3.1.4 主要试剂 |
| 3.1.5 主要溶液的配制 |
| 3.1.6 生物信息学分析软件 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 皮肤组织中总RNA的提取 |
| 3.2.2 检测总RNA质量 |
| 3.2.3 反转录 |
| 3.2.4 荧光定量PCR程序 |
| 3.2.5 文库构建和测序 |
| 3.2.6 LncRNA高通量测序 |
| 3.2.7 测序数据预处理 |
| 3.2.8 样品间相关性和PCA分析 |
| 3.2.9 新LncRNA的预测 |
| 3.2.10 LncRNA基因差异表达分析 |
| 3.2.11 差异表达LncRNA qRT-PCR验证 |
| 3.2.12 LncRNA靶基因的预测 |
| 3.2.13 LncRNA靶基因功能显着性富集分析 |
| 3.2.14 差异表达LncRNA的K-means分析 |
| 3.2.15 LncRNA与mRNA共表达网络分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 测序RNA样本的提取和检测质量结果 |
| 3.3.2 测序数据预处理及质量评估 |
| 3.3.3 Mapping reads在各个基因区域及染色体上的分布分析 |
| 3.3.4 LncRNA预测分析 |
| 3.3.5 候选LncRNA的描述性统计 |
| 3.3.6 LncRNA和蛋白编码基因特征比较分析 |
| 3.3.7 样品间相关性和PCA分析检验 |
| 3.3.8 LncRNA基因分类分析 |
| 3.3.9 LncRNA差异表达分析 |
| 3.3.10 不同时期间差异表达LncRNA的筛选及聚类分析 |
| 3.3.11 差异表达LncRNA在不同时期间比较分析 |
| 3.3.12 LncRNA cis与trans靶标预测 |
| 3.3.13 LncRNA靶基因GO富集分析 |
| 3.3.14 LncRNA靶基因KEGG Pathway分析 |
| 3.3.15 K-means聚类分析 |
| 3.3.16 LncRNA与mRNA共表达网络分析 |
| 3.3.17 实时荧光定量PCR分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 试验样本的选择 |
| 3.4.2 LncRNA高通量测序分析 |
| 3.4.3 差异LncRNA筛选 |
| 3.4.4 不同比较组中时期特异性差异表达LncRNA的功能分析 |
| 3.4.5 不同比较组中共有差异表达LncRNA的功能分析 |
| 3.4.6 差异LncRNA靶基因的预测分析 |
| 3.4.7 差异LncRNA靶基因的功能富集分析 |
| 3.4.8 qRT-PCR验证分析 |
| 3.4.9 组织形态学与转录组测序试验的关联性分析 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 候选LncRNA以及目标基因对绵羊成纤维细胞增殖凋亡的作用 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试验样品的采集 |
| 4.1.2 试验用仪器设备 |
| 4.1.3 主要试剂与耗材 |
| 4.1.4 慢病毒载体与多克隆位点信息 |
| 4.1.5 定量引物序列 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 皮肤组织中总RNA的提取 |
| 4.2.2 TCONS＿00202353、TCONS＿00453233和TCONS＿00428783基因慢病毒表达载体构建 |
| 4.2.3 细胞培养及细胞系的建立 |
| 4.2.4 重组慢病毒的制备 |
| 4.2.5 TCONS＿00202353、TCONS＿00453233和TCONS＿00428783慢病毒感染成纤维细胞及细胞系筛选 |
| 4.2.6 细胞生长曲线测定 |
| 4.2.7 克隆形成试验 |
| 4.2.8 细胞凋亡检测 |
| 4.2.9 双荧光素酶载体构建方法 |
| 4.2.10 双荧光素酶靶标验证方法 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 成纤维细胞培养 |
| 4.3.2 成纤维细胞总RNA提取 |
| 4.3.3 TCONS＿00202353、TCONS＿00453233和TCONS＿00428783的蛋白编码能力分析 |
| 4.3.4 3个LncRNA以及3个目标基因在成纤维细胞中的特异性表达 |
| 4.3.5 过表达载体的构建 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 SFRP2基因的功能 |
| 4.4.2 DKK1基因的功能 |
| 4.4.3 Hoxc13基因的功能 |
| 4.4.4 关于TCONS＿00202353、TCONS＿00453233和TCONS＿00428783及SFRP2、DKK1和Hoxc13之间的关系 |
| 4.4.5 TCONS＿00202353功能分析 |
| 4.4.6 TCONS＿00453233和TCONS＿00428783功能分析 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 全文结论 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 研究展望 |
| 参考文献 |
| 附图及附表 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（9）胚胎期肉鸡脂肪代谢的蛋白质组学和代谢组学分析及（-）-羟基柠檬酸调控机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 本文部分缩写的中英文对照 |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 禽类脂肪沉积研究进展 |
| 1 禽类脂肪沉积机制 |
| 1.1 脂肪合成代谢 |
| 1.2 脂肪分解代谢 |
| 1.3 脂肪的转运 |
| 2 禽类体内脂肪分布 |
| 3 脂肪沉积的影响因素 |
| 3.1 基因对脂肪沉积的影响 |
| 3.2 性别和年龄对腹部脂肪沉积的影响 |
| 3.3 营养水平 |
| 3.4 环境温度 |
| 4 脂肪沉积对禽类的影响 |
| 4.1 对生长性能的影响 |
| 4.2 对繁殖性能的影响 |
| 4.3 对消费者健康的影响 |
| 参考文献 |
| 第二章 禽类脂肪代谢的调控 |
| 1 各器官对脂肪代谢的调控 |
| 1.1 脂肪组织对脂肪合成和分解的调控 |
| 1.2 肝脏对脂肪代谢的调控 |
| 1.3 肌肉中糖和脂肪分解代谢的调控 |
| 2 激素水平调节 |
| 2.1 胰岛素对脂肪代谢的调控 |
| 2.2 胰高血糖素 |
| 2.3 脂联素 |
| 2.4 甲状腺素 |
| 3 酶活性调节 |
| 4 营养水平调节 |
| 5 添加剂 |
| 参考文献 |
| 第三章 (-)-羟基柠檬酸调控脂肪代谢研究进展 |
| 1 (-)-HCA的发现和理化性质 |
| 2 (-)-HCA的生物学功能 |
| 2.1 (-)-HCA对体重的影响 |
| 2.2 (-)-HCA对脂代谢的影响 |
| 2.3 (-)-HCA对糖代谢的影响 |
| 2.4 (-)-HCA其它生物学功能 |
| 参考文献 |
| 第四章 多组学分析的应用 |
| 1 组学技术概述 |
| 1.1 基因组学 |
| 1.2 转录组学 |
| 1.3 蛋白质组学 |
| 1.4 代谢组学 |
| 2 多组学分析的应用 |
| 2.1 在人类中的应用 |
| 2.2 在植物中的应用 |
| 2.3 在动物中的应用 |
| 参考文献 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第一章 基于代谢组学技术揭示肉鸡胚胎发育过程中血清代谢物变化 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 主要仪器设备和试剂 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 代谢物提取 |
| 1.4 LC/MS-QTOF分析 |
| 1.5 数据质量评估及统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 数据可靠性评价 |
| 2.2 血清代谢物主成分分析(PCA)模型图 |
| 2.3 血清代谢物偏最小二乘回归分析(PLS-DA)模型图及差异代谢物筛选 |
| 2.4 血清差异代谢物聚类分析 |
| 2.5 代谢通路富集分析结果 |
| 2.6 血清差异代谢物相互作用网络分析 |
| 3 讨论与小结 |
| 3.1 讨论 |
| 3.2 小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 基于蛋白质组学技术分析肉鸡胚胎发育过程中肝脏蛋白表达的变化 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 主要仪器设备和试剂 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 样品处理 |
| 1.4 肽段反相色谱分离 |
| 1.5 LC-ESI-MS/MS分析 |
| 1.6 蛋白质鉴定及定量 |
| 1.7 生物信息学分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 蛋白质鉴定结果 |
| 2.2 差异表达蛋白筛选 |
| 2.3 差异表达蛋白GO富集分析 |
| 2.4 差异蛋白KEGG注释 |
| 2.5 差异蛋白网络互作分析 |
| 3 讨论与小结 |
| 3.1 讨论 |
| 3.2 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 (-)-羟基柠檬酸对胚胎期肉鸡肝脏脂肪代谢的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 主要仪器设备和试剂 |
| 1.2 试验动物及处理 |
| 1.3 样品采集与处理 |
| 1.4 检测指标及方法 |
| 1.5 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 胚胎及各组织器官重量 |
| 2.2 血清生化指标及HE染色 |
| 2.3 PAS染色与肝糖原含量分析 |
| 2.4 血清脂代谢相关指标 |
| 2.5 油红O染色及肝脏脂代谢相关指标分析 |
| 2.6 血清激素含量变化 |
| 2.7 肝脏脂代谢相关基因mRNA表达水平 |
| 3 讨论与小结 |
| 3.1 讨论 |
| 3.2 小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 (-)-羟基柠檬酸调节胚胎期肉鸡血清差异代谢物及关键代谢途径分析 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 主要仪器设备和试剂 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 样品采集与处理 |
| 1.4 TG含量检测 |
| 1.5 肝脏中脂肪代谢相关基因mRNA表达水平检测 |
| 1.6 代谢物提取 |
| 1.7 LC/MS-QTOF分析 |
| 1.8 数据质量评估及统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 胚胎重量、肝脏绝对重量和TG含量 |
| 2.2 肝脏脂代谢相关基因mRNA表达水平检测结果 |
| 2.3 数据可靠性评价 |
| 2.4 血清代谢物PCA模型图 |
| 2.5 血清代谢物PLS-DA模型图及差异代谢物筛选 |
| 2.6 血清差异代谢物聚类分析 |
| 2.7 代谢通路富集分析结果 |
| 2.8 血清代谢物相互作用网络分析 |
| 3 讨论与小结 |
| 3.1 讨论 |
| 3.2 小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 (-)-羟基柠檬酸调控胚胎期肉鸡脂肪代谢主要效应蛋白的筛选和鉴定 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 主要仪器设备和试剂 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 样品处理 |
| 1.4 肽段反相色谱分离 |
| 1.5 LC-ESI-MS/MS分析 |
| 1.6 蛋白质鉴定及定量 |
| 1.7 生物信息学分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 蛋白质鉴定结果 |
| 2.2 差异蛋白筛选 |
| 2.3 差异蛋白GO富集分析 |
| 2.4 差异蛋白KEGG注释 |
| 2.5 差异蛋白网络互作分析 |
| 3 讨论与分析 |
| 3.1 讨论 |
| 3.2 小结 |
| 参考文献 |
| 总体讨论 |
| 1 肉鸡胚胎发育后期机体动态代谢变化特点 |
| 2 (-)-HCA对肉鸡胚胎发育期脂肪代谢的影响 |
| 3 (-)-HCA处理对肉鸡胚胎血清代谢物和肝脏蛋白质变化的影响 |
| 3.1 代谢组学和蛋白质组学联合分析 |
| 3.2 脂肪酸代谢途径 |
| 3.3 糖酵解/糖异生 |
| 3.4 柠檬酸循环 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 全文创新点 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（10）苏博美利奴羊毛囊发育不同时期相关基因的筛选（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 苏博美利奴羊 |
| 1.2 皮肤结构及毛囊发育历程 |
| 1.3 绵羊毛囊发育的研究进展 |
| 1.4 毛囊发育相关基因功能的研究进展 |
| 1.5 测序技术及研究进展 |
| 1.6 研究目的及意义 |
| 第2章 苏博美利奴羊毛囊发育不同时期转录组测序分析 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 苏博美利奴羊毛囊发育不同时期差异表达基因筛选 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 实时荧光定量PCR验证转录组信息 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 KAP16基因对细毛羊重要经济性状的遗传效应分析 |
| 5.1 试验材料 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、胚胎期汗腺发生的研究进展（论文参考文献）
- [1]影响汗腺发育的信号通路及其参与汗腺样细胞体外重建的研究进展[J]. 郎东浩,巴特,曹胜军,李芳,董行,李俊亮,王凌峰. 中华烧伤与创面修复杂志, 2022(02)
- [2]人脂肪间充质干细胞向汗腺样细胞诱导分化的实验研究[D]. 郎东浩. 内蒙古医科大学, 2021
- [3]间充质干细胞与汗腺细胞融合实现汗腺再生的可行性研究[J]. 刘坤坤,赵亚平,高玮,高慧,谢淼. 河北医药, 2020(17)
- [4]PRP对毛囊干细胞和毛囊生长的影响及机制[D]. 朱美抒. 南方医科大学, 2020(01)
- [5]中国美利奴羊（新疆军垦型）胎儿期皮肤毛囊发育相关miRNA的筛选与功能研究[D]. 杨涵羽璐. 石河子大学, 2019(05)
- [6]Wnt10b和FGF18基因在天祝白牦牛毛囊周期性发育中表达的研究[D]. 郭雪峰. 西北民族大学, 2019(01)
- [7]TNF-α调控mRNA m6A甲基化影响间充质干细胞向汗腺特异分化的机制研究[D]. 王一惠. 天津医科大学, 2019(02)
- [8]苏博美利奴羊毛囊发育相关LncRNA的筛选与功能分析[D]. 阿布来提·苏来曼. 新疆农业大学, 2018
- [9]胚胎期肉鸡脂肪代谢的蛋白质组学和代谢组学分析及（-）-羟基柠檬酸调控机制研究[D]. 彭梦玲. 南京农业大学, 2018(07)
- [10]苏博美利奴羊毛囊发育不同时期相关基因的筛选[D]. 何军敏. 新疆农业大学, 2018